Author: НПП "Гарант-Сервис"
Last saved by: Zaharova Marina
Document comments: Документ экспортирован из системы ГАРАНТ

Приложение 10
(обязательное)

Общие требования
к контролю содержания микроорганизмов в воздухе рабочей зоны

1. Общие положения

1.1. Методика определяет требования к измерению в воздухе рабочей зоны концентраций микроорганизмов, живых клеток и спор, находящихся в составе товарных форм бактериальных препаратов, на биотехнологических предприятиях, а также в воздухе общественных и промышленных зданий.
1.2. К использованию в технологических процессах допускаются штаммы микроорганизмов, разрешенные к применению Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
1.3. Контроль воздуха на содержание вредных веществ биологической природы - продуктов микробного синтеза (ферменты, витамины, антибиотики и др.) проводится так, как это принято для химических веществ.

2. Требования к отбору проб

2.1. Отбор проб воздуха для контроля содержания микроорганизмов проводится путем аспирации их из воздуха на поверхность плотной питательной среды.
2.2. Отбору проб должна предшествовать краткая характеристика микроорганизмов: указываются семейство, род, вид, штамм, морфологическая характеристика колоний на твердой питательной среде и оптимальные условия роста колоний на твердой питательной среде (рН, Т°).
2.3. Отбор проб воздуха проводят:
- при засеве инокуляторов в зоне дыхания и между инокуляторами;
- при отборе проб из инокуляторов;
- при засеве посевных аппаратов (при условии прямого засеивания);
- при отборе проб из посевных аппаратов у пробника и между посевными аппаратами;
- при отборе проб из ферментеров;
- при спуске культуральной жидкости из ферментеров в коагуляторы или прямо на фильтрацию.
Если в технологическом процессе имеет место сушка биомассы, то отбор проб проводится:
- при перемешивании;
- при выгрузке из сушильных аппаратов;
- при фасовке биомассы.
Перечисленные точки отбора ориентировочные и на каждом предприятии устанавливаются индивидуально с учетом данных валидации, характеристик процесса, методологии тестирования и т.п.
2.4. При текущем контроле в одном помещении число контрольных точек должно быть не менее трех.
2.5. Для сравнительного анализа концентраций микроорганизмов в воздухе рабочей зоны отбор проб должен проводиться не реже 1 раза в неделю в аналогичной по интенсивности технологического процесса временной период.
2.6. Объем пробы воздуха должен быть достаточным для обнаружения микроорганизмов. Он устанавливается опытным путем с учетом характеристик используемого пробоотборника и концентрации микроорганизмов в тестируемой зоне.
Примечание. Для импакторов и центрифужных пробоотборников одним из ограничивающих факторов является высыхание поверхности агара при больших объемах проб, а так же# возможность повреждения поверхности агарового слоя (растрескивание).
2.7. Отбор проб проводится с концентрированием воздуха на чашке Петри с посевной средой.
Отбор проб на содержание микроорганизмов проводят в рабочей зоне; высота установки прибора 1,5 м от уровня пола.

3. Характеристика метода

3.1. Метод основан на аспирации микроорганизмов из воздуха на поверхность плотных питательных сред - элективных (избирательных для данного микроорганизма) или элективно-дифференциальных (путем добавления в среду ингибиторов - антибиотики, желчь, молочная кислота, красители; цветных индикаторов или других специфических химических веществ, позволяющих выявить диагностические признаки данного микроорганизма). После инкубации в термостате производится подсчет выросших колоний по типичным морфологическим признакам.
Примечания.
1. Выбор питательной среды является одним из важных факторов. Базовой средой для культивирования бактерий является среда N 1(МПА)*, среда N 2 (агар Сабуро) и солодовый агар для культивирования дрожжей и мицелиальных грибов**. Посевы бактерий выращивают в термостате при t 35-40°С в течение 24-48 ч, культуры дрожжей и грибов - при t 25-30°С в течение 72 и более часов.
2. Перед отбором проб разлитые на чашки Петри или пластины питательные среды выдерживают в термостате при t 37°С в течение 24 ч для подтверждения стерильности. Проросшие чашки бракуют.
3. Ростовые свойства питательных сред должны быть проверены соответствующими тест-штаммами.

3.2. Микроорганизмы, выросшие на чашке Петри, подлежат макро- и микроскопической идентификации. К макроскопическим признакам относятся форма и размеры колоний, цвет, консистенция, к микроскопическим признакам - форма (кокки, бациллы, овоиды и т.п.), подвижность (количество жгутиков), отношение к окраске по Граму, наличие спор и капсул.
3.3. Для дальнейшей индикации и дифференциации микроорганизмов могут быть использованы биохимические методы, различные автоматизированные системы, а также любые современные методы идентификации микроорганизмов.
3.4. Предел измерения от 1 до 5 х 10(6) кл/м3.

4. Приборы и посуда

4.1. Для бактериологического анализа воздуха используют импактор воздуха микробиологический "Флора-100" (ТУ 64-098-33-95).
Примечание. Современная отечественная модель - высокопроизводительный импактор "Флора 100" работает в автоматическом режиме, отбирает заданный объем воздуха и осаждает биологический аэрозоль на чашку Петри с плотной питательной средой. Импактор полностью заменяет широко используемый для контроля прибор Кротова и превосходит его по всем техническим характеристикам (точность определения, масса, габариты, скорость пробоотбора, автоматический контроль параметров пробоотбора и диагностики неисправностей).
Импактор "Флора 100" прошел государственные испытания и рекомендован Комитетом по новой технике (протокол N 7 от 26.12.95) к применению в медицинской практике.

4.2. Методику проведения контроля с использованием импактора "Флора-100" рекомендуется согласовывать с разработчиком импактора для уточнения времени аспирации в зависимости от особенностей контролируемой микрофлоры.
4.3. Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (ТУ 64-1-791-77).
4.4 Секундомер ГОСТ 9586-75
4.5. Чашки бактериологические, плоскодонные, стеклянные диаметром 100 мм, ГОСТ 10937-75.
4.6. Термостаты электрические суховоздушные, типа ТС, ТУ 64-1-1382-76.
4.7. Пипетки мерные, ГОСТ 1770-74.
4.8. Колбы конические, ГОСТ 1770-74.
4.9. Весы аналитические ВЛА-200-М.
4.10. Камера для стерильной сушки чашек Петри типа ЕМЗ 804-014СП.

5. Методика проведения контроля

5.1. Воздух аспирируют со скоростью от 10-20 до 150-200 л/мин на поверхность плотной питательной среды на чашках Петри.
5.2. Время аспирации (2-10 мин) зависит от концентрации микроорганизма в воздухе.
5.3. Термостатирование чашек Петри с пробами воздуха производится при температуре 25-40°С в зависимости от биологической характеристики микроорганизма.
5.4. Метод предполагает учет по типичным морфологическим признакам количества колоний, выросших на 2-4 сутки и более после посева пробы воздуха в зависимости от видовой принадлежности микроорганизма.
5.5. Прямой метод позволяет учитывать на чашке Петри до 150-200 колоний. Результаты рассчитывают в кл/м3.
Примечание. Проблемной комиссии по гигиеническому нормированию с целью унификации методических подходов принято согласованное решение единицей измерения принять "клетки" (а не колониеобразующие клетки, хотя это правильно).

Единицы измерения указывать обязательно.

            К = П х 1000/С х t     кл/м3, где

     К    - концентрация микроорганизма в воздухе, кл/м3;
     П    - количество  изотипов  микроорганизма  (сходных  по морфологии
            колоний), выросших на чашке Петри;
     1000 - коэффициент пересчета 1 л в 1 м3 воздуха;
     С    - скорость аспирации, л/мин;
     t    - время аспирации, мин.

5.6. Результаты замеров вносят в протокол.

Протокол
оценки содержания промышленных штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны (рекомендуемый)

                                              Дата_______________________

1. Ф.,И.,О. работающего (рабочее место) _________________________________
_________________________________________________________________________
2. Профессия_____________________________________________________________
3. Производство__________________________________________________________
4. Участок (технологическая стадия, операция)____________________________
5. Точка отбора (наименование оборудования у которого производится отбор)
_________________________________________________________________________
6. Вид пробоотборника____________________________________________________
7. Дата последней метрологической поверки оборудования для отбора проб___
8. Микроорганизм, содержание которого контролируется (род, вид, штамм)___
9. Питательная среда, оптимум роста, время инкубации_____________________
10. Количественная  и  качественная   характеристика   выросших   колоний
(морфологические признаки - форма, цвет, консистенция; окраска  по Граму;
количество типичных колоний) ____________________________________________
_________________________________________________________________________
11. Результаты идентификации микроорганизмов с указанием метода__________
_________________________________________________________________________
12. Результаты расчета концентрации микроорганизма (кл/м3)_______________
_________________________________________________________________________
13. Соотношение полученных результатов с уровнем ПДКр.з._________________
_________________________________________________________________________

Отбор пробы произведен:
________________________(Ф.,И.,О., должность)___________(подпись, дата)
Идентификация штамма и расчет концентрации произведен:
________________________(Ф.,И.,О., должность)___________(подпись, дата)

_____________________________
* Определитель бактерий Берджи. Москва, Мир, 1997, 2 т, 780 с.
** ДеСаттон, А. Фоттергилл, М. Ринальди. Определитель патогенных и условно патогенных грибов. Москва, Мир, 2001, 468 с.